Myco-Visible Mycoplasma LAMP Detection Kit

Mycoplasma 오염은 동물세포 배양과정에서 흔히 발생하는 문제로, 세포배양을 오염시켜, metabolism, morphology, proliferation 등과 같은 세포의 특성 (characteristics)와 기능(functionalities)을 변화시키며, 때로는 실험결과의 왜곡과 세포 손실을 야기할 수도 있습니다.
하지만 cell wall이 없는 특징으로 인해 세포배양에 사용되는 일반적인 항생제에 영향을 받지 않으며, 크기가 작아 일반 필터로 잘 제거되지도 않습니다.
세포 배양에서 마이코플라즈마 오염율을 확인하기 위한 여러 연구가 진행되어 왔습니다. 미국에서의 연구는 마이코플라즈마 오염율을 10-15% 정도로 제시하였지만, 어떤 연구에서는 오염율이80%까지 높을 수 있다고 추정하기도 하였으며, 따라서 세계적으로 약 25%-50% 정도의 오염율을 예상해 볼 수 있습니다. 이런 높은 오염율은 산업계에서 매우 중요한 문제이며, 심각한 경제적인 손실을 초래할 수도 있습니다.
세포 배양 오염의 대부분은 human, porcine 또는 bovine host유래의 6-8종류의 마이코플라즈마 종으로 부터 발생하는데, Mycoplasma orale과  Mycoplasma hyorrhinis가  가장 흔합니다.

Myco-Visible Mycoplasma LAMP 검출 키트는 세포 배양에서 mycoplasma 오염을 높은 민감도와 특이도로 빠르게 검출할 수 있는 방법입니다. 이 키트는 mycoplasma 게놈의 16S rRNA 코딩 영역을 표적으로 삼아 이를 증폭하여 검출을 수행합니다. 이 영역은 Acholeplasma laidlawii, Mycoplasma arginini, Mycoplasma fermentans, Mycoplasma hominis, Mycoplasma hyorhinis, Mycoplasma orale, Mycoplasma pneumoniae, Mycoplasma salivarium을 포함한 모든 Mollicutes에서 잘 보존된 부분입니다. 검출 절차는 45분 이내에 완료될 수 있으며, 반응당 최소 10개의 16S rRNA 사본 또는 10 fg의 Mycoplasma 게놈 DNA만으로도 검출이 가능합니다. Primer-BLAST 결과에 따르면 다른 세균, 곰팡이, 포유류 DNA와의 교차 반응이 없음이 검증되었습니다.  이 검출 방법은 PCR 장비가 필요 없으며, 양성 결과는 핑크색에서 노란색으로의 색 변화를 통해 쉽게 확인할 수 있습니다.

결과 판독

 

1. 반응액 색깔이 노란색이나 오랜지 색으로 변경된 경우 양성(마이코플라즈마 오염)으로 해석됩니다 

2. 반응액 색깔이 핑크색으로 그대로 남아있을 경우 음성으로 해석됩니다.

 

 

 

그림 1: Mycoplasma spp.의 여섯 가지 균주를 사용하여 10³부터 10 copies/µL까지 10배 단계 희석을 수행했습니다. 그 결과, 이 키트가 최소 10 copies의 16S rRNA 또는 10 fg의 Mycoplasma genomic DNA를 검출할 수 있음을 확인했습니다.

그림 2: Myco-Visible Mycoplasma LAMP detection Kit의 특이성 테스트. Mycoplasma와 유전적으로 관련된 6가지 세균 종에서 1 x 10⁵ copies/reaction의 정제된 gDNA를 테스트했습니다. 모든 샘플에서 음성 결과가 나타나, 교차 반응이 없음을 확인했습니다.

Application Notes

Myco-visible Mycoplasma LAMP Detection Kit는 세포 배양에서 마이코플라즈마 종을 빠르고 민감도와 특이도가 높게 검출할 수 있도록 최적화된 등온 증폭 방식의 핵산 증폭 검사 키트입니다.

Usage Statement

Research Use Only (RUO)